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詳細解析山羊ELISA試劑盒的原理和操作步驟

釋出時間↟·₪│·: 2022-07-26  點選次數↟·₪│·: 136次
  山羊ELISA試劑盒是以免疫學反應為基礎☁✘│✘,將抗原▩•、抗體的特異性反應與酶對底物的高效催化作用相結合起來的一種敏感性很高的實驗技術✘▩₪。由於抗原▩•、抗體的反應在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行☁✘│✘,每加入一種試劑孵育後☁✘│✘,可透過洗滌除去多餘的遊離反應物☁✘│✘,從而保證試驗結果的特異性與穩定性✘▩₪。

  實際應用中☁✘│✘,透過不同的設計☁✘│✘,具體的方法步驟可有多種✘▩₪。即↟·₪│·:用於檢測抗體的間接法▩•、用於檢測抗原的雙抗體夾心法以及用於檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等✘▩₪。目前我們對客戶提供比較常用的ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法服務✘▩₪。

  山羊ELISA試劑盒的基本原理↟·₪│·:
  1▩•、抗原或抗體能吸附到固相載體表面☁✘│✘,並保持其免疫學活性;
  2▩•、抗原或抗體可透過共價鍵與酶連線形成酶結合物☁✘│✘,仍保持其免疫學和酶學活性;
  3▩•、酶結合物與相應抗原或抗體結合後☁✘│✘,可根據加入底物的顏色反應來判定是否有免疫反應的存在☁✘│✘,而且顏色反應的深淺是與標本中相應抗原或抗體的量成正比例☁✘│✘,因此☁✘│✘,可以按底物顯色的程度顯示試驗結果✘▩₪。

  山羊ELISA試劑盒的操作步驟↟·₪│·:
  1▩•、使用前☁✘│✘,將所有試劑充分混勻✘▩₪。不要使液體產生大量的泡沫☁✘│✘,以免加樣時加入大量的氣泡☁✘│✘,產生加樣上的誤差;
  2▩•、根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數✘▩₪。每個標準品和空白孔建議做復孔✘▩₪。每個樣品根據自己的數量來定☁✘│✘,能使用復孔的儘量做復孔✘▩₪。標本用標本稀釋液1↟·₪│·:1稀釋後加入50ul於反應孔內;
  3▩•、加入稀釋好後的標準品50ul於反應孔▩•、加入待測樣品50ul於反應孔內✘▩₪。立即加入50ul的生物素標記的抗體✘▩₪。蓋上膜板☁✘│✘,輕輕振盪混勻☁✘│✘,37℃溫育1小時;
  4▩•、甩去孔內液體☁✘│✘,每孔加滿洗滌液☁✘│✘,振盪30秒☁✘│✘,甩去洗滌液☁✘│✘,用吸水紙拍幹✘▩₪。重複此操作3次✘▩₪。如果用洗板機洗滌☁✘│✘,洗滌次數增加一次;
  5▩•、每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP☁✘│✘,輕輕振盪混勻☁✘│✘,37℃溫育30分鐘;
  6▩•、甩去孔內液體☁✘│✘,每孔加滿洗滌液☁✘│✘,振盪30秒☁✘│✘,甩去洗滌液☁✘│✘,用吸水紙拍幹✘▩₪。重複此操作3次✘▩₪。如果用洗板機洗滌☁✘│✘,洗滌次數增加一次;
  7▩•、每孔加入底物A▩•、B各50ul☁✘│✘,輕輕振盪混勻☁✘│✘,37℃溫育10分鐘✘▩₪。避免光照;
  8▩•、取出酶標板☁✘│✘,迅速加入50ul終止液☁✘│✘,加入終止液後應立即測定結果;
  9▩•、在450nm波長處測定各孔的OD值✘▩₪。
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