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分享₪•·☁╃!小鼠白介素ELISA試劑盒的實驗操作步驟

釋出時間▩✘◕↟: 2022-11-26  點選次數▩✘◕↟: 71次
  小鼠白介素ELISA試劑盒採用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)✘☁。往預先包被小鼠白介素捕獲抗體的包被微孔中·☁,依次加入標本▩☁•、標準品▩☁•、HRP標記的檢測抗體·☁,經過溫育並洗滌✘☁。用底物TMB顯色·☁,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色·☁,並在酸的作用下轉化成最終的黃色✘☁。顏色的深淺和樣品中的小鼠呈正相關✘☁。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值)·☁,計算樣品濃度✘☁。
 
  它的五大優點▩✘◕↟:
  1▩☁•、適用血清▩☁•、血漿▩☁•、組織勻漿液▩☁•、細胞培養上清液▩☁•、尿液等等多種標本型別;
  2▩☁•、吸附效能好·☁,空白值低✘☁。孔底透明度高的固相載體;
  3▩☁•、穩定的重複性和可靠;
  4▩☁•、高效▩☁•、靈敏▩☁•、特異的抗體;
  5▩☁•、較大限度的節省實驗經費✘☁。
 
  小鼠白介素ELISA試劑盒的實驗操作步驟▩✘◕↟:
  1▩☁•、把試劑混勻·☁,切記實驗時不要加理大量含有泡沫的液體·☁,避免實驗產生誤差✘☁。
  2▩☁•、跟資料測樣決定板條數✘☁。每個標準品和空白孔建議做復孔✘☁。每個樣品根據自己的數量來定·☁,能使用復孔的儘量做復孔✘☁。
  3▩☁•、加入稀釋好後的標準品50ul於反應孔 加入待測樣品50ul於反應孔內✘☁。立即加入50ul的生物素標記的抗體✘☁。蓋上膜板·☁,輕輕振盪混勻·☁,37℃溫育1小時✘☁。
  4▩☁•、甩去孔內液體·☁,每孔加滿洗滌液·☁,振盪30秒·☁,甩去洗滌液·☁,用吸水紙拍幹✘☁。重複此操作3次✘☁。如果用洗板機洗滌·☁,洗滌次數增加一次✘☁。
  5▩☁•、每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP·☁,輕輕振盪混勻·☁,37℃溫育30分鐘✘☁。
  6▩☁•、甩去孔內液體·☁,每孔加滿洗滌液·☁,振盪30秒·☁,甩去洗滌液·☁,用吸水紙拍幹✘☁。重複此操作3次✘☁。如果用洗板機洗滌·☁,洗滌次數增加一次✘☁。
  7▩☁•、每孔加入底物各50ul·☁,輕輕振盪混勻·☁,37℃溫育10分鐘✘☁。一定要避免光照✘☁。
  8▩☁•、取出酶標板·☁,迅速加入50ul終止液·☁,加入終止液後應立即測定結果✘☁。
  9▩☁•、在450nm波長處測定各孔的OD值✘☁。
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