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按這個步驟操作駱駝ELISA試劑盒▩✘◕✘,簡單易懂╃◕✘╃!

釋出時間☁₪◕: 2022-08-27  點選次數☁₪◕: 98次
  駱駝ELISA試劑盒具有高效◕•▩◕↟、快捷◕•▩◕↟、易批次操作等優點▩✘◕✘,不同的廠家提供不同種類▩✘◕✘,不同型別的Elisa試劑盒產品▩✘◕✘,為科研使用者帶來極大的方便•▩。該試劑盒能夠針對特定檢測源▩✘◕✘,製備特異性抗原抗體▩✘◕✘,根據應用需要量身定製檢測試劑盒▩✘◕✘,有效控制檢測試劑成本•▩。下面我們來看看它的具體實驗步驟•▩。
 

 

  駱駝ELISA試劑盒的實驗步驟☁₪◕:
  1.標本的採取和儲存☁₪◕:可用作ELISA測定的標本十分廣泛▩✘◕✘,體液(如血清)◕•▩◕↟、分泌物(唾液)和排洩物(如尿液◕•▩◕↟、糞便)等均可作標本以測定其中某種抗體或抗原成分•▩。有些標本可直接進行測定(如血清◕•▩◕↟、尿液)▩✘◕✘,有些則需經預處理(如糞便和某些分泌物)•▩。大部分ELISA檢測均以血清為標本•▩。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外▩✘◕✘,其他成分均同等於血清•▩。製備血漿標本需藉助於抗凝劑▩✘◕✘,而血清標本只要待血清自然凝固◕•▩◕↟、收縮後即可取得•▩。除特殊情況外▩✘◕✘,在醫學檢驗中均以血清作為檢測標本•▩。在ELISA中血漿和血清可同等應用•▩。血清標本可按常規方法採集▩✘◕✘,應注意避免溶血▩✘◕✘,紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質▩✘◕✘,以HRP為標記的ELISA測定中▩✘◕✘,溶血標本可能會增加非特異性顯色•▩。
  2.試劑的準備☁₪◕:按試劑盒說明書的要求準備實驗中需用的試劑•▩。ELISA中用的蒸餾水或去離子水▩✘◕✘,包括用於洗滌的▩✘◕✘,應為新鮮的和高質量的•▩。自配的緩衝液應用pH計測量較正•▩。從冰箱中取出的試驗用試劑應待溫度與室溫平衡後使用•▩。試劑盒中本次試驗不需用的部分應及時放回冰箱儲存•▩。
  3.加樣☁₪◕:在ELISA中一般有3次加樣步聚▩✘◕✘,即加標本▩✘◕✘,加酶結合物▩✘◕✘,加底物•▩。加樣時應將所加物加在LEISA板孔的底部▩✘◕✘,避免加在孔壁上部▩✘◕✘,並注意不可濺出▩✘◕✘,不可產生氣泡•▩。加標本一般用微量加樣器▩✘◕✘,按規定的量加入板孔中•▩。每次加標本應更換吸嘴▩✘◕✘,以免發生交叉汙染▩✘◕✘,也可用一次性的定量塑膠管加樣•▩。有此測定(如間接法ELISA)需用稀釋的血清▩✘◕✘,可在試管中按規定的稀釋度稀釋後再加樣•▩。也可在板孔中加入稀釋液▩✘◕✘,再在其中加入血清標本▩✘◕✘,然後在微型震盪器上震盪1分鐘以保證混和•▩。加酶結合物應用液和底物應用液時可用定量多道加液器▩✘◕✘,使加液過程迅速完成•▩。
  4.保溫☁₪◕:在ELISA中一般有兩次抗原抗體反應▩✘◕✘,即加標本和加酶結合物後•▩。抗原抗體反應的完成需要有一定的溫度和時間▩✘◕✘,這一保溫過程稱為溫育(incubation)▩✘◕✘,有人稱之為孵育▩✘◕✘,在ELISA中似不恰當•▩。ELISA屬固相免疫測定▩✘◕✘,抗原◕•▩◕↟、抗體的結合只在固相表面上發生•▩。以抗體包被的夾心法為例▩✘◕✘,加入板孔中的標本▩✘◕✘,其中的抗原並不是都有均等地和固相抗結合的機會▩✘◕✘,只有貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸•▩。這是一個逐步平衡的過程▩✘◕✘,因此需經擴散才能達到反應的終點•▩。在其後加入的酶標記抗體與固相抗原的結合也同樣如此•▩。這就是為什麼ELISA反應總是需要一定時間的溫育•▩。
  5.洗滌☁₪◕:洗滌在ELISA過程中雖不是一個反應步驟▩✘◕✘,但卻也決定著實驗的成敗•▩。ELISA是靠洗滌來達到分離遊離地和結合的酶標記物的目的•▩。透過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結合的物質▩✘◕✘,以及在反應過程中非特異性的吸附於固相•▩。
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